農用微生物菌劑的標準是什么?農用微生物菌劑采用的是國家標準(GB 20287-2006),詳細內容如下:
1 范圍
本標準規(guī)定了農用微生物菌劑(即微生物接種劑)的術語和定義、產品分類、要求、試驗方法、檢驗規(guī)則、包裝、標識、運輸和貯存。
本標準適用于農用微生物菌劑類產品。
2 規(guī)范性引用文件(略)
3 術語和定義(略)
4 產品分類
產品按劑型可分為液體、粉劑、顆粒型;按內含的微生物種類或功能特性可分為根瘤菌菌劑、固氮菌菌劑、解磷類微生物菌劑、硅酸鹽微生物菌劑、光合細菌菌劑、有機物料腐熟劑、促生菌劑、菌根菌劑、生物修復菌劑等。
5 要求
5.1 菌種
生產用的微生物菌種應安全、有效。生產者應提供菌種的分類鑒定報告,包括屬及種的學名、形態(tài)、生理生化特性及鑒定依據等完整資料。生產者應提供菌種安全性評價資料。采用生物工程菌,應具有允許大面積釋放的生物安全性有關批文。
5.2 產品外觀(略)
5.3 產品技術指標
5.3.1 農用微生物菌劑產品的技術指標見表1,其中有機物料腐熟劑產品的技術指標按表2執(zhí)行。
表1 農用微生物菌劑產品的技術指標
項 目 | 劑 型 | |||
液 體 | 粉 劑 | 顆 粒 | ||
有效活菌數(shù)(cfu)a ,億/g(mL) | ≥ | 2.0 | 2.0 | 1.0 |
霉菌雜菌數(shù),個/g(mL) | ≤ | 3.0×106 | 3.0×106 | 3.0×106 |
雜菌率, % | ≤ | 10.0 | 20.0 | 30.0 |
水分,% | ≤ | - | 35.0 | 20.0 |
細度,% | ≥ | - | 80 | 80 |
pH值 | 5.0~8.0 | 5.5~8.5 | 5.5~8.5 | |
保質期b,月 | ≥ | 3 | 6 | |
a 復合菌劑,每一種有效菌的數(shù)量不得少于0.01億/g(mL);以單一的膠質芽胞桿菌(Bacillus mucilaginosus)制成的粉劑產品中有效活菌數(shù)不少于1.2億/g。 b 此項僅在監(jiān)督部門或仲裁雙方認為有必要時檢測。 |
表2 有機物料腐熟劑產品的技術指標
項目 | 劑 型 | |||
液 體 | 粉 劑 | 顆 粒 | ||
有效活菌數(shù)(cfu), 億/g(mL) | ≥ | 1.0 | 0.50 | 0.50 |
纖維素酶活a,U/g(mL) | ≥ | 30.0 | 30.0 | 30.0 |
蛋白酶活b,U/g(mL) | ≥ | 15.0 | 15.0 | 15.0 |
水 分,% | ≤ | - | 35.0 | 20.0 |
細 度,% | ≥ | - | 70 | 70 |
pH值 | 5.0~8.5 | 5.5~8.5 | 5.5~8.5 | |
保質期c,月 | ≥ | 3 | 6 | |
a 以農作物秸稈類為腐熟對象測定纖維素酶活。 b 以畜禽糞便類為腐熟對象測定蛋白酶活。 c 此項僅在監(jiān)督部門或仲裁雙方認為有必要時檢測。 |
5.3.2 農用微生物菌劑產品中無害化指標見表3。
表3 農用微生物菌劑產品的無害化技術指標
參數(shù) | 標準極限 | |
糞大腸菌群數(shù),個/g(mL) | ≤ | 100 |
蛔蟲卵死亡率,% | ≥ | 95 |
砷及其化合物(以As計),mg/kg | ≤ | 75 |
鎘及其化合物(以Cd計),mg/kg | ≤ | 10 |
鉛及其化合物(以Pb計),mg/kg | ≤ | 100 |
鉻及其化合物(以Cr計),mg/kg | ≤ | 150 |
汞及其化合物(以Hg計),mg/kg | ≤ | 5 |
6 試驗方法
6.1 儀器設備(略)
6.2 試劑(略)
6.3 產品參數(shù)的檢測
6.3.1 外觀(感官)的測定
取少量樣品放到白色搪瓷盤(或白色塑料調色板)中,仔細觀察樣品的顏色、形狀、質地。
6.3.2 有效活菌數(shù)的測定
采用平板計數(shù)法,根據所測微生物的種類選用適宜的培養(yǎng)基。
若采用最大可能數(shù)(Most Probable Number,MPN)5管法,遵照附錄C的規(guī)定。
6.3.2.1 系列稀釋
稱取樣品10 g(精確到0.01 g),加入帶玻璃珠的100 mL的無菌水中(液體菌劑取l0.0 mL加入90 mL的無菌水中),靜置20 min,在旋轉式搖床上200 r/min充分振蕩30 min,即成母液菌懸液(基礎液)。
用無菌移液管分別吸取5.0mL上述母液菌懸液加入45 mL無菌水中,按1:10進行系列稀釋,分別得到1:1×101,1:1×102,1:1×103,1:1×104……稀釋的菌懸液(每個稀釋度應更換無菌移液管)。
6.3.2.2 加樣及培養(yǎng)
每個樣品取3個連續(xù)適宜的稀釋度,用無菌移液管分別吸取不同稀釋度菌懸液0.1 mL,加至預先制備好的固體培養(yǎng)基平板上,分別用無菌玻璃刮刀將不同稀釋度的菌懸液均勻地涂于瓊脂表面。
每一稀釋度重復3次,同時以無菌水作空白對照,于適宜的條件下培養(yǎng)。
6.3.2.3 菌落識別
根據所檢測菌種的技術資料,每個稀釋度取不同類型的代表菌落通過涂片、染色、鏡檢等技術手段確認有效菌。當空白對照培養(yǎng)皿出現(xiàn)菌落數(shù)時,檢測結果無效,應重做。
6.3.2.4 菌落計數(shù)
以出現(xiàn)20~300個菌落數(shù)的稀釋度的平板為計數(shù)標準(絲狀真菌為10~150個菌落數(shù)),分別統(tǒng)計有效活菌數(shù)目和雜菌數(shù)目。當只有一個稀釋度,其平均菌落數(shù)在20~300個之間時,則以該平均菌落數(shù)計算。若有兩個稀釋度,其平均菌落數(shù)均在20~300個之間時,應按兩者菌落總數(shù)之比值決定。若其比值小于等于2應計算兩者的平均數(shù);若大于2則以稀釋度小的菌落平均數(shù)計算。有效活菌數(shù)按式(1)或式(2)計算:
nm =
kv1/(m0v2) ×10-8 …………………(1)
nv =
kv1/(v0v2) ×10-8 …………………(2)
式中:
nm — 質量有效活菌數(shù), 億/g
nv — 體積有效活菌數(shù), 億/mL
— 菌落平均數(shù), 個
k — 稀釋倍數(shù)
v1 — 基礎液體積, mL
v2 — 菌懸液加入量, mL
v0 — 樣品量, mL
m0 — 樣品量, g
6.3.3 霉菌雜菌數(shù)的測定
采用馬丁培養(yǎng)基,測定方法同6.3.2。
6.3.4 雜菌率的測定
除樣品有效菌外其它的菌均為雜菌。樣品中雜菌率按式(3)計算:
m = n1/(n1+n)×100 …………………(3)
式中:
m — 樣品雜菌率, %
n1 — 雜菌數(shù), 億/g(mL)
n — 有效活菌數(shù), 億/g(mL)
6.3.5 水分的測定
將空鋁盒置于干燥箱中105 ℃±2 ℃烘干 0.5 h,冷卻后稱量記錄空鋁盒的質量。然后稱取2份平行樣品(顆粒型樣品,應先粉碎過1.0 mm試驗篩),每份20 g(精確到0.01 g),分別加入鋁盒中并記錄質量。將裝好樣品的鋁盒置于干燥箱中105 ℃±2 ℃下烘干4 h~6 h。取出置于干燥器中冷卻20 min后進行稱量。水分含量按式(4)計算(結果為兩次測定的平均值):
w = (m1- m2)/( m1- m0) ×100 …………………(4)
式中:
w — 樣品水分含量, %
m0 — 空鋁盒的質量, g
m1 — 樣品和鋁盒的質量, g
m2 — 烘干后樣品和鋁盒的質量, g
6.3.6 細度的測定
6.3.6.1 粉劑樣品
稱取樣品50 g(精確到0.1 g),放入300 mL燒杯中,加200 mL水浸泡10 min~30 min后倒入孔徑0.18 mm的試驗篩中,然后用水沖洗,并用刷子輕輕地刷篩面上的樣品,直至篩下流出清水為止。將試驗篩連同篩上樣品放入干燥箱中,在105 ℃±2 ℃烘干4 h ~6 h。冷卻后稱量篩上樣品質量。樣品細度按式(5)計算:
s ={1- m1/[ m0(1-w)]} ×100 …………………(5)
式中:
s — 篩下樣品質量分數(shù), %
m0 — 樣品質量, g
w — 樣品含水量, %
m1 — 篩上干樣品質量, g
6.3.6.2 顆粒樣品
稱取樣品50 g(精確到0.1 g),將兩個不同孔徑的試驗篩(1.0 mm和4.75 mm)摞在一起放在底盤上(大孔徑試驗篩放在上面)。樣品倒入大孔徑試驗篩內篩樣品,然后稱小孔徑試驗篩上的樣品質量。顆粒細度按式(6)計算:
g = m1 /m0 ×100 …………………(6)
式中:
g — 樣品質量分數(shù), %
m1 — 小孔徑試驗篩上樣品質量,g
m0 — 樣 品 質 量, g
6.3.7 pH值的測定
打開酸度計電源預熱30 min,用標準溶液校準。
pH值的測定,每個樣品重復三次,計算三次的平均值。
6.3.7.1 液體樣品
用量筒取40mL樣品放入50 mL的燒杯中,直接用酸度計測定,儀器讀數(shù)穩(wěn)定后記錄。
6.3.7.2 粉劑樣品
稱取樣品15 g,放入50 mL的燒杯中,按1:2(樣品:無離子水)的比例將無離子水加到燒杯中(如果樣品含水量低,可根據基質類型按1:3~1:5的比例加無離子水),攪拌均勻。然后靜置30 min,測樣品懸液的pH值,儀器讀數(shù)穩(wěn)定后記錄。
6.3.7.3 顆粒樣品
樣品先研碎過1.0 mm試驗篩,按照6.3.7.2的方法測定。
6.3.8 糞大腸菌群數(shù)的測定
應符合GB/T 19524.1《肥料中糞大腸菌群的測定》的規(guī)定。
6.3.9 蛔蟲卵死亡率的測定
應符合GB/T 19524.2《肥料中蛔蟲卵死亡率的測定》的規(guī)定。
6.3.10 纖維素酶活、蛋白酶活的測定
應符合附錄D的規(guī)定。
6.3.11 砷、鎘、鉛、鉻、汞的測定
應符合GB 18877—2002中的5.12~5.17的規(guī)定。
6.3.12 保質期的檢驗
在產品說明書標明的保質期前,按6.3.1~6.3.11方法測定產品相應指標。
7 檢驗規(guī)則
本標準中產品技術指標的數(shù)字修約應符合GB 8170的規(guī)定;產品質量合格判定應符合GB 1250中修約值比較法的規(guī)定。
7.1 抽樣
按每一發(fā)酵罐菌液(或每批固體發(fā)酵)加工成的產品為一批,進行抽樣檢驗,抽樣過程嚴格避免雜菌污染。
7.1.1 抽樣工具
無菌塑料袋(瓶),金屬勺、抽樣器、量筒、牛皮紙袋、膠水、抽樣封條及抽樣單等。
7.1.2 抽樣方法和數(shù)量
一般在成品庫中抽樣,采用隨機法抽取。
抽樣以件為單位,小包裝以每一包裝箱為一件。隨機抽取3~5件,每件中隨機抽取一袋(瓶);若每袋(瓶)包裝小于500 g(mL)的產品,應多抽幾件。大包裝產品以一袋(桶)為一件,隨機抽取5~10件,在無菌條件下,每件取樣500 g(mL),然后將抽取樣品混勻,按四分法分裝3袋(瓶),每袋(瓶)不少于500 g(mL)。
7.2 檢驗分類(略)
7.3 判定規(guī)則
7.3.1 具下列任何一條款者,均為合格產品
a. 檢驗結果各項技術指標均符合標準要求的產品;
b. 在產品的外觀、水分、細度、pH值等檢測項目中,有1項不符合要求,而其它各項技術指標符合要求的產品。
7.3.2 具下列任何一條款者,均為不合格產品
a. 有效活菌數(shù)不符合技術指標;
b. 霉菌雜菌數(shù)不符合技術指標;
c. 雜菌率不符合技術指標;
d. 糞大腸菌群不符合技術指標;
e. 蛔蟲卵死亡率不符合技術指標;
f. 砷、鎘、鉛、鉻、汞中任一含量不符合技術指標;
g. 有機物料腐熟劑產品中所測酶活不符合技術指標;
h. 在外觀、水分、細度、pH值等檢測項目中,有2項(含)以上不符合要求。
8 包裝、標識、運輸和貯存
參見NY 885-2004《農用微生物產品標識要求》
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